有心室流出道梗阻的患者因具有特征性临床表现，诊断并不困难。超声心动图检查是极为重要的无创性诊断方法，无论对梗阻性与非梗阻性的患者都有帮助，特别是在室间隔厚度≥18mm的情况下。诊断肥厚型心肌病时，二尖瓣收缩期前移是一个明显的特征，可用于区分梗阻性与非梗阻性病例。此外，心导管检查显示左心室流出道压力差可以确立诊断，而心室造影也对诊断有一定的价值。

临床上，如果在胸骨下段左缘听到收缩期杂音，应考虑可能是本病的迹象。通过观察生理动作或药物对血流动力学的影响，可以帮助确定诊断。同时，还需进行以下鉴别诊断：

1. **心室间隔缺损：** 虽然收缩期杂音的位置相近，但心尖区通常没有杂音，超声心动图、心导管检查和心血管造影可以帮助区别。

2. **主动脉瓣狭窄：** 症状和杂音性质相似，但杂音的位置较高，可能伴有主动脉瓣区收缩期喷射音和第二心音减弱。X线检查可能显示升主动脉扩张。生理动作或药物对杂音的影响较小，而左心导管检查显示主动脉瓣前后存在收缩期压力差。超声心动图可以明确病变部位。

3. **风湿性二尖瓣关闭不全：** 杂音相似，但常为全收缩期，血管收缩药或下蹲可以增强杂音，常伴有心房颤动，左心房较大，超声心动图不显示室间隔缺损。

4. **冠心病：** 心绞痛、心电图上的ST-T改变与异常Q波是共同的特征，但冠心病没有特征性的杂音。主动脉可能增宽或有钙化，同时伴有高血压和高血脂。超声心动图显示室间隔不增厚，但可能有节段性室壁运动异常。