HSV病毒可从气管支气管分泌物、支气管肺泡灌洗液和肺组织中获得。纤维支气管镜采集标本应在早期进行。经皮细针抽吸肺活检和开胸肺活检无帮助。皮肤粘膜损伤处囊液中病毒的最高分离率为80% ~ 98%，溃疡结痂愈合时病毒的分离率下降(

HSV感染的实验室诊断应从两方面进行评估:一是确定患者是否在排出病毒，是否存在HSV感染进行积极的抗病毒治疗。其次，在疑似患者因病毒再激活出现临床症状前，确定患者血清抗体是否阳性，以检查其过去是否感染过HSV，从而确定是否需要在骨髓移植、器官移植、诱导化疗前采取预防性抗病毒治疗。

1.细胞培养组织培养是最敏感和特异的诊断方法，也可用于病毒分型。在病毒滴度较高的样品中，24 ~ 48小时内可获得阳性结果，接种后72小时内在90%培养基中可产生特征性细胞病变效应。然而，在低滴度标本中，只有在7天后才能看到特征性变化。但组织培养并不总能确立病毒的存在，这是由于标本的采集和运输不当，以及使用抗病毒药物时存在假阴性的可能。

2.检测病毒

(1)巴氏(Pap)或Tzank试验:这是一种快速而廉价的细胞诊断方法。首先，病变部位的涂片细胞染色可在20分钟内显示细胞变化，即多核巨细胞形成、细胞空泡化和包涵体。阳性涂片结果是可靠的，但它不能区分水痘带状疱疹病毒(VZV)与HSV-1或HSV-2。涂片阴性不能排除疱疹病毒感染。理想情况下，Tzanck涂片的阳性率在50%左右，其敏感性和特异性较低，且依赖于检测者的经验。由于许多技术和实际原因，它的应用受到限制。

(2)单克隆抗体间接免疫荧光染色:用于病变的涂片检查，灵敏度为78% ~ 88%，假阳性少见。直接电子显微镜检查具有吸引力，因为它可以在2h内完成，但它的灵敏度是可变的，特异性较低。用酶联免疫吸附试验检测单纯疱疹病毒，灵敏度为95%，特异性高。但是，如果在采集后不立即检查样品，灵敏度会降低。还有一种单纯疱疹病毒的放射免疫测定法。荧光素标记抗体试验、间接免疫过氧化物酶试验或使用单克隆抗体的酶免疫试验等。这些方法便宜、快速且不需要细胞培养技术。新开发的用单克隆抗体直接荧光素标记抗体染色的离心技术快速而敏感，但它更常用于诊断巨细胞病毒。免疫荧光法直接检测HSV抗原特异性高，但灵敏度差，且依赖于样本质量。

酶免疫分析(EIA)可以检测HSV抗原，包括培养扩增技术和直接检测技术。结果表明，HSV EIA对不同来源的样品具有高度敏感性(93.7%)和高度特异性(96.6%)。该方法简单、重现性好、快速(4h)。当标本被细菌污染时，结果受到影响，已治愈或正在接受抗病毒治疗的患者的结果不可靠。支气管标本和下呼吸道分泌物病毒培养阳性结果一般需要2 ~ 5天，而阴性结果需要2周才能确诊。

(3)DNA探针技术的应用:DNA探针有助于HSV感染的诊断。当细胞形态可疑时，DNA探针可以确定诊断。有几个因素会混淆形态学诊断:①HSV包涵体与巨细胞病毒(CMV)和腺病毒(腺病毒)的包涵体相似。HSV和CMV双重感染时。③除HSV外，其他呼吸道病毒也能产生多核细胞。原位杂交定位一种特殊病毒的基因组序列，比传统方法更简单快捷。

(4)聚合酶链反应(PCR):即使石蜡包埋组织有一致的病理改变，PCR也能为HSV病毒感染提供确凿的依据。每次检查必须有阴性对照组织。虽然有隐性感染的可能，但在无病毒病变的对照组织中，HSV经PCR检测仍为阴性。该方法快速(一天内完成)、准确、特异且高度灵敏，可用于处理陈旧或复杂的标本。PCR的结果与HSV培养的结果相似。PCR没有Tzanck涂片和病毒培养的技术和实践限制，它在怀疑HSV感染的免疫抑制患者的快速诊断中显示出其优越性。

3.血清学检查。这种方法最大的价值是证明患者已经感染了HSV，血液循环中的抗HSV抗体是反复感染的可能标志。抗体滴度增加4倍或更多表明最近感染了HSV。HSV抗体可通过多种方法检测，包括补体结合试验、微量中和试验和酶免疫试验。这些方法高度敏感和可靠，但血清学检查不能区分内源性病毒感染和再感染。血清学检查结果没有诊断意义，对快速诊断没有帮助。另一个问题是HSV-1和HSV之间的交叉反应，因此不能确定急性HSV感染的血清分型。只有当急性期血清中没有HSV抗体时，血清学检查才能用于诊断HSV的原发感染。在这种情况下，如果抗体出现在恢复期血清中，可以称为血清转化。HSV肺炎抗体滴度不升高时，往往说明预后差，病毒容易广泛传播。

4.三种常用的病毒分型方法是单纯疱疹病毒分型。首先，标准方法是限制性内切酶切割和琼脂糖凝胶电泳分离。HSV-1和HSV-2的DNA类型不同，所以很容易区分HSV-1和HSV-2。第二种方法是用荧光素标记的特异性单克隆抗体进行病毒分型，具有快速、直接检测切片和培养基的优点。第三种方法是使用5-溴乙烯基脱氧尿苷(BrdU)，它只有在细胞培养基中保持适当的浓度才能阻断HSV-1复制。HSV的血清分型对流行病学非常重要，临床医生很少需要这些信息，除了HSV生殖道感染和HSV脑炎。

对于非致命的HSV感染，可以进行病毒培养的实验室检查，因为这种感染往往可以在临床上被识别，在提取标本后的几天内就可以得到病毒确认。至于致命的HSV感染，需要立即采取抗病毒治疗，因此需要对HSV感染进行快速准确的诊断。最好的方法是免疫荧光染色。严重HSV感染患者早期抗病毒治疗预后良好。虽然可以在诊断前进行抗病毒治疗，但快速的阳性检测结果可以促使医生尽快开始抗病毒治疗。严重HSV感染的新生儿患者可能只有皮肤损害作为HSV感染的证据，快速诊断和检查尤为重要。如果延误诊治，很快就会出现其他部位的扩散，预后明显恶化。在无症状的HSV感染患者中，不应过分强调HSV的快速诊断试验。

x线胸片与其他肺部感染很难区分。它可以表现为局限性、多发性或弥漫性间质浸润。早期典型肺门或弥漫性间质密度增加，支气管壁增厚。随着疾病的进展，可以看到斑片状的肺泡填充物。单纯疱疹病毒性支气管炎胸片可以正常。