暗场检查:最准确的诊断方法是从早期获得性或先天性梅毒病灶中发现具有典型形状和活动的螺旋体。暗视野检查对一期梅毒、二期梅毒和先天性梅毒的湿粘膜损害常可给出阳性结果。二期梅毒淋巴穿刺有时呈阳性。然而，在梅毒的第一阶段，也可以获得假阴性结果，因为患者在病灶上使用了肥皂或其他有毒化合物。因此，阴性结果不能排除梅毒。对于可疑损害和初始暗视觉阴性的病例，最好注意不要清洗病灶，每天回来连续检查两次。但在临床实践中，对高危对象(吸毒人员、同性恋活跃男性)的疑似损害进行血清学检查后再进行治疗更为安全。尤其是龈缘附近，口腔内也可存在螺旋体，形态上与梅毒螺旋体相同。通常，诊断应根据临床表现、病史和血清学试验做出。

暗场检查时，应使用生理盐水纱布清洁疑似溃疡性病变的表面，以避免出血。如果标本中有红细胞，少量梅毒螺旋体很难见到。挤压(带手套操作)有助于获得浆液，放在载玻片上，盖上盖玻片，可以用暗场显微镜检查。活着的梅毒螺旋体缓慢地来回移动，沿着它的长轴旋转，而不是突然在中心弯曲90°。由于大多数临床医生没有合适的设备，也不熟悉暗场检查技术，他们应该向公共卫生部门寻求帮助。

通过荧光素标记的抗体染色或银染，也可以在活检标本中发现梅毒螺旋体(图24和25)。