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(1)常规检查包括血象、尿液和粪便检查。血象:白细胞总数常减少,约为(3 ~ 5) × 10 9/L,按分类,中性粒细胞减少伴有核左移,淋巴细胞和单核细胞数量相对增多。嗜酸性粒细胞减少或消失。若嗜酸性粒细胞分类计数超过2%或绝对计数高于0.04× 10 9/L,且无寄生虫病(血吸虫病、钩虫病等。),伤寒的诊断要非常慎重。恢复期后,白细胞总数逐渐恢复正常,嗜酸性粒细胞重新出现。疾病复发时,嗜酸性粒细胞再次减少或消失,对疾病进程有一定的提示作用。红细胞和血红蛋白没有明显变化。重症患者病程较长,或并发肠道出血,可能出现贫血。如怀疑急性血管内溶血、溶血性尿毒症综合征或DIC,应做相应的特殊检查。
尿液:高热患者可有轻度蛋白尿,偶尔见少数管型。
粪便:如遇肠道出血,可出现大便隐血或便血。
(2)细菌学检查①血培养是诊断的论据,在疾病早期可呈阳性。第7 ~ 10病日阳性率可达90%,第3周降至30% ~ 40%,第4周常为阴性;②骨髓培养阳性率高于血培养阳性率,尤其是对曾接受过抗生素治疗而血培养阴性者;③粪便培养,从潜伏期即可获得阳性率,第3 ~ 4周可达80%,病后第6周阳性率迅速下降,3%的患者可排菌一年以上;④尿培养:疾病晚期阳性率可达25%,但应避免粪便污染;⑤玫瑰疹的刮取或活检切片也可培养阳性。
(3)免疫学检查
1.费乌达氏试验伤寒的血清凝集试验,即费乌达氏反应阳性者,对伤寒、副伤寒有辅助诊断价值。检查中使用了五种抗原,包括伤寒沙门氏菌(O)抗原、鞭毛(H)抗原、副伤寒甲、乙、丙鞭毛抗原。目的是用凝集法测定患者血清中各种抗体的凝集效价。病程第一周阳性反应不多。一般从第二周开始阳性率逐渐升高,第四周达到90%,恢复后阳性反应可持续数月。少数患者抗体上升很晚,甚至在整个病程中抗体滴度很低(14.4%)或阴性(7.8% ~ 10%)。所以不能排除这种病。
肥达试验已经使用了近100年。在20世纪60年代,一些人反对它的特异性,认为它的结果令人困惑。肥达对非伤寒疾病的检测也显示阳性结果,如各种急性感染、肿瘤、结缔组织疾病和慢性溃疡性结肠炎。Perl等认为无菌结肠细胞和肠杆菌科细菌可能具有相同的抗原,结肠黏膜损伤产生的抗结肠抗体与沙门氏菌属细菌抗原有交叉反应。因此,对费尔达反应结果的判断要慎重,密切结合临床资料,强调恢复期血清抗体滴度的比较。有人建议用流行毒株的抗原与国际毒株比较,可提高阳性率,并建议用地方流行毒株代替国际标准毒株,以提高疫区伤寒诊断的阳性率。
2.其他免疫学测试
(1)被动血凝试验(PHA):用伤寒杆菌细菌抗原致敏红细胞,红细胞与被检血清发生反应。根据红细胞的凝集情况,判断是否存在伤寒特异性抗体。国内外报道的阳性率为90% ~ 98.35%,假阳性率约为5%。包兴浩等报道伤寒血培养患者LSP-PHA检出率为89.66%,早期患者为90.02%,临床确诊患者为82.5%。主要检测特异性IgM抗体,可用于早期诊断。
(2) CIE:该方法可用于血清中可溶性伤寒抗原或抗体的检测,且操作简单,便于在基层推广,特异性高;但敏感性较低,占不同作者报道的24% ~ 92%,主要受采集血清时间的影响。在伤寒早期容易检测到,因此可用于伤寒的早期诊断。
(3)协同凝集试验(COA):基于金黄色葡萄球菌的葡萄球菌蛋白A (SPA)能与抗体IgG的Fc段结合的原理,先将带有SPA的葡萄球菌用伤寒抗体致敏,再与抗原反应。该试验的阳性率为81% ~ 92.5%,特异性为94% ~ 98%。总的来说,它的灵敏度比CIE高,但特异性比CIE差。
(4)免疫荧光试验(IFT): Doshi等人以伤寒沙门菌Vi悬液为抗原检测间接免疫荧光抗体,血培养阳性的140例伤寒患者中有134例(95.7%)阳性;94例对照中仅有4例(1%)为假阳性,目前关于该方法的报道很少。伤寒疫苗接种和其他沙门氏菌感染是否会影响该试验的特异性还需要进一步研究。
(5)酶联免疫吸附试验(ELISA):ELISA的基本原理:ELISA利用酶反应的放大作用来显示初级免疫反应,可同时检测抗原和抗体。ELISA检测伤寒病人Vi抗原的灵敏度可达1ng/ml,高于CoA法的9100ng/ml,并可在1∶1024稀释后检测到尿液中的Vi抗原。国内外ELISA法已用于检测临床标本中的Vi抗原、V9抗原、LPS和H抗原,灵敏度为62.5% ~ 93.1%,依赖于检测的抗原超过80%。杭州鲍杭浩等用ELISA同时检测IgM和IgG抗体。LPS-IgM-ELISA的敏感性和特异性分别为91.38%、99.02%和93.1%和98.02%。在伤寒的血清免疫学诊断方法中,ELISA具有简单、快速、敏感、特异性高等优点,是公认的良好诊断方法。
分子生物学诊断方法
1.DNA探针(DNA Probe) DNA探针是由DNA制备的诊断试剂,用于检测或鉴定特定的细菌。方法是将标记的特定DNA片段(探针)与标本中变性的细菌DNA杂交,通过判断是否发生杂交反应来达到检测的目的。由于这种探针是由细菌专有的特异性基因片段制备的,因此具有很高的特异性。用DNA探针检测培养的伤寒沙门氏菌,灵敏度需要检测标本中的1000个细菌。DNA探针特异性高,灵敏度低,一般用于菌株鉴定和分离。
2.聚合酶链反应(PCR) PCR法是80年代中后期发展起来的一种分子生物学方法。它能在体外几小时内将目的基因或DNA片段扩增到数百万倍,检出率比DNA探针高100 ~ 10000倍。国外Jae HS等人用PCR方法扩增伤寒鞭毛抗原编码基因,灵敏度可检测10种伤寒菌,特异性100%。PCR法由于灵敏度高,容易出现。